——沃特世18種鄰苯二甲酸鹽UPLC/MS/MS分析解決方案
 

　　近日，中國臺灣媒體報道了起云劑遭受增塑劑污染的事件，導致食品安全檢測市場頓時風起“云”涌，鄰苯二甲酸鹽的檢測再度成為人們關注的焦點。

　　起云劑（又名渾濁劑、乳濁劑、增濁劑）也就是我們常說的乳化穩定劑。主要應用于飲料和奶類制品。在飲料中使用，有助于釋放與保留果汁飲料的香氣，包埋果汁飲料的異味、雜味，也能增強果汁飲料口感的潤滑性、厚實感，尤其是有效改良果汁飲料的天然感觀，顯著提高果汁飲料的品質質量。起云劑的主要成分為風味油、單體香油、增重劑、乳化穩定劑、乳化劑、水，它本身對人體并沒有危害，本次事件的發生是由于少數起云劑生產廠家為降低成本使用在食品中禁用的增塑劑類物質鄰苯二甲酸鹽代替原本應該使用的棕櫚油，從而引發了食品安全事件。

　　確保食品添加劑或者食品本身是否含有鄰苯二甲酸鹽類物質的一個途徑就是使用分析手段對其進行檢測。

　　我們常說的鄰苯二甲酸鹽是一類結構比較相似的化合物，在2011年6月，中國衛生部將17種鄰苯二甲酸鹽類物質列入《食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑名單（第六批）》名單，如下：

　　鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、

　　鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）、

　　鄰苯二甲酸二苯酯（DPP）、

　　鄰苯二甲酸二甲酯（DMP）、

　　鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、

　　鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）、

　　鄰苯二甲酸二戊酯（DPP）、

　　鄰苯二甲酸二己酯（DHXP）、

　　鄰苯二甲酸二壬酯（DNP）、

　　鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP）、

　　鄰苯二甲酸二環己酯（DCHP）、

　　鄰苯二甲酸二正辛酯（DNOP）、

　　鄰苯二甲酸丁基芐基酯（BBP）、

　　鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯（DMEP）、

　　鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯（DEEP）、

　　鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP）、

　　鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯（BMPP）

　　本方法介紹了兩種基于沃特世超液相色譜技術（UPLC技術）分析18種（含中國臺灣FDA要求）鄰苯二甲酸鹽的方法，方法一為采用沃特世超液相色譜質譜聯用技術（UPLC/MS/MS），該方法具有分析速度快，靈敏度高的特點。適用于實驗室擁有質譜系統并追求檢測靈敏度的用戶。方法二為采用沃特世超液相色譜系統和二極管陣列檢測器（UPLC/PDA）分析方法，適用于暫時還不具有質譜系統的用戶。

　　樣品提取（中國臺灣FDA方法）：

　　取混勻后樣品1g，稱量，置于50ml容量瓶，加入約45ml 甲醇，超聲波震蕩30min, 冷卻后用MeOH 定容到50ml。靜置后，取上部溶液約5ml置于離心管中，于 3500rpm離心10min,取上清液裝瓶,待測。對于基質比較復雜的樣品，對于提取后的樣品可以采用進一步的固相萃取凈化手段。

 

【方法一：UPLC/MS/MS方法】

實驗條件

A．UPLC 條件
LC系統：     ACQUITY UPLC H Class系統
色譜柱：   ACQUITY UPLC HSS C18，1.7um，2.1X100mm，
流動相A：0.1%FA水溶液
流動相B：乙腈
流速：0.4ml/min
梯度洗脫:   梯度表

 

進樣體積：10uL
柱溫：35℃,   
樣品溫度：    10℃
強洗溶劑：    ACN 
弱洗溶劑：    H2O :ACN= 95:5
運行時間：    7.5分鐘

B. MS條件:
系統：          ACQUITY UPLC TQD
離子化模式：ESI+
電離電壓：   3.2KV
離子源溫度：120℃
脫溶劑氣溫度：  400℃
脫溶劑氣流量:   650L/Hr

 

 

18種鄰苯二甲酸鹽分析結果（濃度：10ppb）
（DMP、DMEP、DEEP、DEP、DPhP、DEHP、BBP、DIBP、DBP、DBEP、DPP、DCHP、BMPP、DHXP、DNOP、DINP、DNP、DIDP）


部分MRM 通道:


【方法二：UPLC/PDA方法】

A．UPLC/PDA 條件
儀器系統：Waters UPLC H-Class/PDA 
色譜柱：ACQUITY UPLC HSS C18 （1.7um, 2.1×100mm）
波 長：225nm，
柱 溫：45℃，

流 速：0.4mL/min
流動相：A-水，B-乙腈，進行梯度洗脫

18種鄰苯二甲酸鹽色譜分析結果如下圖所示
 

飲料基質1加標與空白結果



飲料基質2加標與空白結果



關于Waters ACQUITY UPLC H-Class
HPLC的操作方法，UPLC的性能
如果您正在進行常規分析，或方法開發，或僅僅是喜歡四元泵系統多溶劑的靈活使用，而又渴望獲得UPLC技術帶來的快速、高靈敏度、高分離度的性能，那么沃特世公司ACQUITY UPLC H-Class系統是您目前*的選擇。ACQUITY UPLC H-Class系統是一套經過優化的*系統，具有四元溶劑混合的靈活性和簡易性，并帶有一個流通式進樣器，可實現UPLC分離的*性能——高分離度、靈敏度和高通量，同時還保持了ACQUITY系統所被*的耐用性和可靠性。
選擇ACQUITY UPLC H-Class，您可以在面向未來的LC平臺上繼續運行現有的HPLC方法，并可實現向UPLC分離的無縫轉換。當您一切準備就緒后，即可使用集成系統工具和可靠的色譜柱工具包進行方法轉換和方法開發，以簡化過渡流程。
特色：
多溶劑混合：QSM可將四種溶劑按任何組合或比例混合。使用選配的內部溶劑選擇閥，將可選溶劑擴展到多達九種，方法更加靈活。
直接注射取樣：SM-FTN的針流入路徑采用專門的技術，在高壓力下能夠保證的進樣針密封性，可實現高精度注射，具有的樣品回收率。
下一代色譜柱溫箱：我們的新式UPLC色譜柱加熱器和管理器已實現了標準化，具有易于操作、體積小的主動式溶劑預加熱器，使系統之間具有相同的效率。色譜柱預熱器保證了穩定的熱效能；色譜柱管理器提供了多區域的靈活性，溫度范圍為4 至 90 °C ，并可疊加使用。
受控的滯留體積：ACQUITY UPLC H-Class 的SmartStart技術（待批）可同時對梯度起始時間和各個預注射步驟進行自動管理。通過將這些典型的連續過程疊加起來，能夠zui大程度地縮短循環時間。

關于Waters ACQUITY UPLC TQD
沃特世TQ 檢測器是為一體化的UPLC®/MS/MS定量分析而開發的儀器，達到串聯四極桿MS的*選擇性、穩定性、速度及準確性。 為契合UltraPerformance LC® （UPLC）的超高性能，TQ檢測器以zui快的速度采集數據。與ACQUITY UPLC®系統一同使用，ACQUITY® TQD 系統為用戶所有的定量分析提供的分析檢測限分辨率及樣品通量，應用范圍包括：生物分析、ADME篩選、食品安全、環境監測、臨床學、法醫學等。
特色：
l 自動化的系統檢查，用戶界面簡單友好，使用方便，優化的MS/MS檢測，滿足zui苛刻的定量分析需求
l 數據采集速度快，色譜峰面積測量方面的準確性、重現性好
l 可靠耐用的ZSpray™ 大氣壓離子源，ESI、APCI、ESCi、APPI、ASAP等各種離子源模式可選
l 工業級的多模式檢測能力,一次運行時，可同時進行多模式的采集
l 自動化的儀器優化與定量方法開發工具，精巧的應用軟件工具包，適合用戶的特定分析要求。
l 快速的數據采集能力，（采用T-Wave™ 碰撞池技術、多模式離子化技術、極性快速轉換技術）